TB-500

¿Qué es TB-500?

La timosina β4 es una proteína de 43 residuos que se une a la actina, el principal componente del esqueleto interno de las células. TB-500 no es esa proteína completa: es la región 17 a 23 de la timosina β4, con el extremo amino acetilado (Ac-LKKTETQ), según un trabajo de control antidopaje que identificó ese fragmento en un preparado vendido como TB-500. ¹ Pesa unos 889 Da (CAS 885340-08-9).

La timosina β4 y su región de unión a actina se estudian como moléculas de reparación de heridas desde hace más de veinte años. ^2,3 El frasco de este catálogo es material de laboratorio, no un medicamento ni un suplemento.

Tras una lesión, la timosina β4 la liberan las plaquetas, los macrófagos y otras células, y se le atribuye proteger células y tejidos de más daño, y reducir la apoptosis, la inflamación y el crecimiento microbiano. ³

Para comprar TB-500, el precio y la existencia de cada presentación están en la parte superior de la página.

Aplicaciones de investigación

Estas son las áreas en las que se estudia TB-500 o la timosina β4 de la que procede, con lo publicado en cada una. Casi todo es preclínico, buena parte se hizo con la proteína completa y no con el fragmento, y cuatro de las seis referencias de esta página son del grupo de Goldstein y Kleinman; las otras dos, el trabajo de identificación analítica y el estudio de Bock-Marquette y colaboradores sobre el corazón, son independientes.

• Heridas de piel. En ratas con heridas de espesor completo, la timosina β4 aplicada de forma tópica o intraperitoneal aumentó la reepitelización un 42 % a los cuatro días y hasta un 61 % a los siete, y aumentó el depósito de colágeno y la angiogénesis. ⁴
• Modelos de cicatrización alterada. En ratones diabéticos db/db y en ratones envejecidos, la proteína aceleró la reparación de heridas dérmicas. El heptapéptido sintético LKKTETQ, que reproduce su dominio de unión a actina, promovió la reparación en los animales envejecidos de forma comparable a la proteína completa. ⁵
• Piel y córnea. Una revisión sitúa a la timosina β4 como la principal molécula que secuestra actina en las células eucariotas y describe su papel en la cicatrización de piel y de córnea. ^2,3
• Identificación analítica. Como preparado vendido en el mercado deportivo, el fragmento Ac-LKKTETQ se caracterizó por cromatografía líquida y espectrometría de masas. ¹

Alcance de estos resultados: estos estudios son en animales y en cultivos, muchos con la proteína completa; no demuestran efectos de TB-500 en personas ni son una guía de uso.

Mecanismo de acción: actina y migración celular

El mecanismo propuesto parte de la biología de la timosina β4:

1. Unión a la actina. La timosina β4 es el principal secuestrador de actina monomérica de las células eucariotas; regula así cuánta actina está disponible para armar el citoesqueleto durante la migración celular. ²
2. El dominio activo. El segmento LKKTETQ es la región de unión a actina de la proteína; en ratones envejecidos, el heptapéptido sintético reprodujo el efecto reparador de la proteína completa. ⁵
3. Migración y angiogénesis. En el modelo de rata, la proteína estimuló la migración de queratinocitos en cultivo y aumentó el depósito de colágeno y la angiogénesis en la herida. ⁴
4. Supervivencia celular por ILK y Akt. En cardiomiocitos, la proteína formó un complejo con PINCH y con la cinasa ligada a integrinas (ILK) y activó la cinasa de supervivencia Akt; tras ligar la arteria coronaria en ratones, mejoró la supervivencia temprana de los miocitos y la función cardiaca. ⁶
5. Células progenitoras y cicatriz. Promueve la migración, la movilización y la diferenciación de células madre y progenitoras que forman vasos y regeneran el tejido, y reduce los miofibroblastos de la herida, con menos cicatriz y fibrosis. ³
6. Cuánta reparación. Aplicada en la herida o por vía intraperitoneal, la proteína aumentó la reepitelización un 42 % a los 4 días y hasta un 61 % a los 7 en ratas, con más colágeno y más vasos; en ratones diabéticos db/db y en ratones de 26 meses también aceleró la reparación. ^4,5

Que el fragmento actúe sólo por su dominio de actina, o también por otros mecanismos de la proteína completa, no está resuelto en los resúmenes consultados.

Pureza HPLC y certificado de análisis (COA)

Con siete residuos y el extremo acetilado, la identidad de TB-500 se confirma mejor por la masa: la espectrometría de masas debe dar unos 889 Da. Es la técnica con la que se caracterizó el fragmento Ac-LKKTETQ en el análisis antidopaje. ¹ La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) separa el péptido de sus impurezas, como secuencias sin acetilar o truncadas, y mide qué parte del cromatograma le pertenece.

Una pureza de ≥ 99 % describe esa fracción del cromatograma, no el contenido neto de péptido del frasco, que además lleva agua y contraiones. El análisis HPLC de los lotes en existencia registra ≥ 99 % para TB-500; en la presentación de 10 mg no hay cifra registrada y la pureza es la que indique el COA de su lote. Cada lote de TB-500 tiene su certificado de análisis (COA).

Como no tiene residuos aromáticos ni azufre, TB-500 casi no absorbe a 280 nm: su cromatograma de HPLC suele registrarse a 214 o 220 nm, donde absorbe el enlace peptídico. Es un péptido de carga neta cercana a cero a pH 7, con dos lisinas, un glutamato y el extremo amino acetilado.

Almacenamiento

El frasco liofilizado y cerrado se conserva a −20 °C, protegido de la luz y de la humedad. Antes de abrirlo se deja llegar a temperatura ambiente, para que no se condense agua sobre el polvo.

Ya reconstituida, la solución se guarda en refrigeración, de 2 a 8 °C. Su fórmula no contiene azufre, así que no tiene metionina ni cisteína que se oxiden, pero la estabilidad física de un péptido en solución sigue dependiendo de la concentración, el pH, la temperatura, la agitación y las superficies. ⁷ Por eso se evita agitar la solución y exponerla a cambios de temperatura, y el plazo de uso lo fija el protocolo del laboratorio; la guía de almacenamiento detalla cada precaución.

Reconstitución para laboratorio

Procedimiento de laboratorio para un frasco de TB-500, con técnica aséptica. Hay una guía general de reconstitución y una calculadora de concentración. El solvente y el volumen del ejemplo son orientativos y manda el protocolo del ensayo.

1. Deja que el frasco liofilizado y el solvente estéril lleguen a temperatura ambiente.
2. Desinfecta los tapones de goma de ambos con alcohol isopropílico al 70 %.
3. Mide el solvente: agua bacteriostática u otro diluyente. Como ejemplo, 2 mL para un frasco de TB-500 5 mg.
4. Haz caer el solvente despacio por la pared de vidrio, sin dirigirlo al polvo.
5. Gira el frasco con suavidad hasta que el polvo se disuelva por completo. No lo agites.
6. Calcula la concentración nominal: miligramos declarados del frasco entre mililitros de solvente. Con TB-500 5 mg en 2 mL son 2,5 mg/mL, unos 2,81 mmol/L con una masa de 889 Da.
7. Guarda la solución en refrigeración y anota la fecha, el solvente y el volumen.

Con TB-500 10 mg en el mismo volumen, la concentración sería de 5 mg/mL, unos 5,62 mmol/L.

Preguntas frecuentes sobre TB-500

Referencias científicas

1. Esposito S, Deventer K, Goeman J, et al. Synthesis and characterization of the N-terminal acetylated 17-23 fragment of thymosin beta 4 identified in TB-500, a product suspected to possess doping potential. Drug Test Anal. 2012;4(9):733-8. PubMed 22962027DOI
2. Goldstein AL, Hannappel E, Kleinman HK. Thymosin beta4: actin-sequestering protein moonlights to repair injured tissues. Trends Mol Med. 2005;11(9):421-9. PubMed 16099219DOI
3. Goldstein AL, Hannappel E, Sosne G, et al. Thymosin β4: a multi-functional regenerative peptide. Basic properties and clinical applications. Expert Opin Biol Ther. 2012;12(1):37-51. PubMed 22074294DOI
4. Malinda KM, Sidhu GS, Mani H, et al. Thymosin beta4 accelerates wound healing. J Invest Dermatol. 1999;113(3):364-8. PubMed 10469335DOI
5. Philp D, Badamchian M, Scheremeta B, et al. Thymosin beta 4 and a synthetic peptide containing its actin-binding domain promote dermal wound repair in db/db diabetic mice and in aged mice. Wound Repair Regen. 2003;11(1):19-24. PubMed 12581423DOI
6. Bock-Marquette I, Saxena A, White MD, et al. Thymosin beta4 activates integrin-linked kinase and promotes cardiac cell migration, survival and cardiac repair. Nature. 2004;432(7016):466-72. PubMed 15565145DOI
7. Zapadka KL, Becher FJ, Gomes Dos Santos AL, et al. Factors affecting the physical stability (aggregation) of peptide therapeutics. Interface Focus. 2017;7(6):20170030. PubMed 29147559DOI

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Envío de TB-500

TB-500 sale por envío express nacional, con entrega estimada de 24 a 48 h en toda la República Mexicana. El envío cuesta $199 y no se cobra cuando los productos del pedido llegan a $2,000, ya aplicado el descuento por volumen.

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